細(xì)胞核提取試劑盒

一，試劑盒組份

二，細(xì)胞核提取試劑盒說明

用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。

三，操作步驟

1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織20次；有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 × g 5~10 min離心收集細(xì)胞。計(jì)數(shù)。每次提取需要5 × 10⁷個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50ul Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，4℃，700× g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀；

3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃， 700 × g 離心5min。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，細(xì)胞核沉淀在管底；

5. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉，1000 × g 離心10min ，棄上清，得較純的細(xì)胞核沉淀；

6. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

四 注意事項(xiàng)：
1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核，*是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞是制備細(xì)胞核的zui關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。
3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。

五 儲(chǔ)存：四周內(nèi)使用可4℃儲(chǔ)存，長(zhǎng)期置-20℃

轉(zhuǎn)速與離心力換算

G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；

 [rpm] ２即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。